Asante kwa kutembelea Nature.com. Toleo la kivinjari unachotumia lina uwezo mdogo wa kutumia CSS. Kwa matokeo bora, tunapendekeza utumie kivinjari kipya (au kuzima hali ya uoanifu katika Internet Explorer). Wakati huo huo, ili kuhakikisha usaidizi unaoendelea, tutaonyesha tovuti bila mitindo na JavaScript.
Kuanzishwa kwa mifano ya wanyama ya mabadiliko ya modic (MC) ni msingi muhimu wa kusoma MC. Sungura 54 wa New Zealand White waligawanywa katika kikundi cha kufanya kazi bandia, kikundi cha upandikizaji wa misuli (kundi la ME) na kikundi cha upandikizaji wa nucleus pulposus (kundi la NPE). Katika kundi la NPE, diski ya intervertebral ilifunuliwa na njia ya upasuaji wa anterolateral lumbar na sindano ilitumiwa kupiga mwili wa vertebral L5 karibu na sahani ya mwisho. NP ilitolewa kutoka kwa diski ya intervertebral ya L1/2 na sindano na kuingizwa ndani yake. Kuchimba shimo kwenye mfupa wa subchondral. Taratibu za upasuaji na njia za kuchimba visima katika kikundi cha uwekaji wa misuli na kikundi cha operesheni ya sham zilikuwa sawa na zile za kikundi cha NP. Katika kikundi cha ME, kipande cha misuli kiliwekwa ndani ya shimo, wakati katika kikundi cha uendeshaji wa sham, hakuna kitu kilichowekwa ndani ya shimo. Baada ya upasuaji, uchunguzi wa MRI na uchunguzi wa kibaolojia wa molekuli ulifanyika. Ishara katika kikundi cha NPE ilibadilika, lakini hakukuwa na mabadiliko ya wazi ya ishara katika kikundi cha uendeshaji wa sham na kikundi cha ME. Uchunguzi wa histolojia ulionyesha kuwa kuenea kwa tishu isiyo ya kawaida kulionekana kwenye tovuti ya kuingizwa, na usemi wa IL-4, IL-17 na IFN-γ uliongezeka katika kundi la NPE. Kuingizwa kwa NP kwenye mfupa wa subchondral kunaweza kuunda mfano wa wanyama wa MC.
Mabadiliko ya modic (MC) ni vidonda vya mwisho wa uti wa mgongo na uboho wa mfupa wa karibu unaoonekana kwenye picha ya resonance ya sumaku (MRI). Ni kawaida kwa watu walio na dalili zinazohusiana1. Masomo mengi yamesisitiza umuhimu wa MC kutokana na ushirikiano wake na maumivu ya chini ya nyuma (LBP)2,3. de Roos et al.4 na Modic et al.5 kwa kujitegemea kwanza walielezea aina tatu tofauti za upungufu wa ishara ya subchondral katika uboho wa mfupa. Mabadiliko ya aina ya modi ya I ni ya chini sana kwenye mfuatano wa uzani wa T1 (T1W) na hyperintense kwenye mfuatano wa T2-weighted (T2W). Kidonda hiki kinaonyesha ncha za mpasuko na tishu zilizo karibu za chembechembe za mishipa kwenye uboho. Mabadiliko ya aina ya Modic II yanaonyesha ishara ya juu kwenye mfuatano wa T1W na T2W. Katika aina hii ya uharibifu, uharibifu wa endplate unaweza kupatikana, pamoja na uingizwaji wa mafuta ya histological ya uboho wa mfupa wa karibu. Mabadiliko ya aina ya Modic III yanaonyesha ishara ya chini katika mfuatano wa T1W na T2W. Vidonda vya sclerotic vinavyolingana na mwisho vimezingatiwa6. MC inachukuliwa kuwa ugonjwa wa ugonjwa wa mgongo na unahusishwa kwa karibu na magonjwa mengi ya kupungua kwa mgongo7,8,9.
Kwa kuzingatia data zilizopo, tafiti kadhaa zimetoa ufahamu wa kina katika etiolojia na taratibu za patholojia za MC. Albert na wenzake. alipendekeza kuwa MC inaweza kusababishwa na upenyezaji wa diski8. Hu et al. kuhusishwa na MC kwa uharibifu mkubwa wa diski10. Kroc alipendekeza dhana ya "kupasuka kwa diski ya ndani," ambayo inasema kwamba kiwewe cha kurudia kinaweza kusababisha microtears kwenye mwisho. Baada ya uundaji wa mpasuko, uharibifu wa endplate na nucleus pulposus (NP) inaweza kusababisha majibu ya autoimmune, ambayo husababisha zaidi maendeleo ya MC11. Ma et al. ilishiriki maoni sawa na kuripoti kuwa kinga ya mwili inayotokana na NP ina jukumu muhimu katika pathogenesis ya MC12.
Seli za mfumo wa kinga, hasa lymphocyte msaidizi za CD4+ T, zina jukumu muhimu katika pathogenesis ya autoimmunity13. Seti ndogo ya Th17 iliyogunduliwa hivi majuzi hutoa sitokine ya uchochezi IL-17, inakuza usemi wa chemokine, na huchochea seli za T katika viungo vilivyoharibiwa kutoa IFN-γ14. Seli za Th2 pia zina jukumu la kipekee katika pathogenesis ya majibu ya kinga. Kujieleza kwa IL-4 kama mwakilishi wa seli ya Th2 kunaweza kusababisha matokeo mabaya ya kinga ya mwili15.
Ingawa tafiti nyingi za kimatibabu zimefanywa kwenye MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, bado kuna ukosefu wa mifano inayofaa ya majaribio ya wanyama ambayo inaweza kuiga mchakato wa MC ambao hutokea mara kwa mara kwa wanadamu na unaweza kuwa. hutumika kuchunguza etiolojia au matibabu mapya kama vile tiba inayolengwa. Hadi sasa, ni mifano michache tu ya wanyama ya MC imeripotiwa kujifunza taratibu za msingi za patholojia.
Kulingana na nadharia ya kinga ya mwili iliyopendekezwa na Albert na Ma, utafiti huu ulianzisha kielelezo cha sungura rahisi na kinachoweza kuzaliana tena kwa kupandikiza NP kiotomatiki karibu na bamba la mwisho la uti wa mgongo lililochimbwa. Malengo mengine ni kuchunguza sifa za histolojia za mifano ya wanyama na kutathmini utaratibu maalum wa NP katika maendeleo ya MC. Kwa madhumuni haya, tunatumia mbinu kama vile baiolojia ya molekuli, MRI, na masomo ya histolojia ili kujifunza kuendelea kwa MC.
Sungura wawili walikufa kwa kuvuja damu wakati wa upasuaji, na sungura wanne walikufa wakati wa anesthesia wakati wa MRI. Sungura 48 waliosalia walinusurika na hawakuonyesha dalili za kitabia au za neva baada ya upasuaji.
MRI inaonyesha kwamba nguvu ya ishara ya tishu iliyoingia kwenye mashimo tofauti ni tofauti. Nguvu ya ishara ya mwili wa vertebral L5 katika kundi la NPE ilibadilika hatua kwa hatua katika wiki 12, 16 na 20 baada ya kuingizwa (mlolongo wa T1W ulionyesha ishara ya chini, na mlolongo wa T2W ulionyesha ishara mchanganyiko pamoja na ishara ya chini) (Mchoro 1C), wakati MRI inaonekana. ya makundi mengine mawili ya sehemu iliyoingia alibakia kiasi imara katika kipindi hicho (Mchoro 1A, B).
(A) Mwakilishi wa MRIs mfululizo wa sungura lumbar mgongo katika pointi 3 wakati. Hakuna ukiukwaji wa mawimbi uliopatikana katika picha za kikundi cha uendeshaji wa udanganyifu. (B) Tabia za ishara za mwili wa vertebral katika kundi la ME ni sawa na wale walio katika kikundi cha uendeshaji wa sham, na hakuna mabadiliko makubwa ya ishara yanazingatiwa kwenye tovuti ya kupachika kwa muda. (C) Katika kikundi cha NPE, ishara ya chini inaonekana wazi katika mlolongo wa T1W, na ishara iliyochanganywa na ishara ya chini inaonekana wazi katika mlolongo wa T2W. Kutoka kipindi cha wiki 12 hadi kipindi cha wiki 20, ishara za juu za mara kwa mara zinazozunguka ishara za chini katika mlolongo wa T2W hupungua.
Hyperplasia ya wazi ya mfupa inaweza kuonekana kwenye tovuti ya kupandikizwa kwa mwili wa vertebral katika kundi la NPE, na hyperplasia ya mfupa hutokea kwa kasi kutoka kwa wiki 12 hadi 20 (Mchoro 2C) ikilinganishwa na kundi la NPE, hakuna mabadiliko makubwa yanayozingatiwa katika uti wa mgongo wa mfano. miili; Kikundi cha Sham na kikundi cha ME (Mchoro 2C) 2A, B).
(A) Uso wa mwili wa vertebral kwenye sehemu iliyowekwa ni laini sana, shimo huponya vizuri, na hakuna hyperplasia katika mwili wa vertebral. (B) Umbo la tovuti iliyopandikizwa katika kundi la ME ni sawa na ile iliyo katika kikundi cha uendeshaji wa sham, na hakuna mabadiliko ya wazi katika kuonekana kwa tovuti iliyopandikizwa kwa muda. (C) Hyperplasia ya mifupa ilitokea kwenye tovuti iliyopandikizwa katika kundi la NPE. Hyperplasia ya mfupa iliongezeka kwa kasi na hata kupanuliwa kupitia diski ya intervertebral hadi mwili wa vertebral ya kinyume.
Uchambuzi wa kihistoria hutoa habari zaidi juu ya malezi ya mfupa. Kielelezo cha 3 kinaonyesha picha za sehemu za baada ya upasuaji zilizochafuliwa na H&E. Katika kikundi cha uendeshaji wa sham, chondrocytes zilipangwa vizuri na hakuna kuenea kwa seli iliyogunduliwa (Mchoro 3A). Hali katika kikundi cha ME ilikuwa sawa na ile ya kikundi cha uendeshaji wa sham (Mchoro 3B). Hata hivyo, katika kundi la NPE, idadi kubwa ya chondrocytes na kuenea kwa seli za NP-kama zilizingatiwa kwenye tovuti ya kuingizwa (Mchoro 3C);
(A) Trabeculae inaweza kuonekana karibu na sahani ya mwisho, chondrocytes hupangwa vizuri na ukubwa wa seli sare na sura na hakuna kuenea (mara 40). (B) Hali ya mahali pa kupandikizwa katika kundi la ME ni sawa na ile ya kikundi cha uwongo. Trabeculae na chondrocytes zinaweza kuonekana, lakini hakuna kuenea kwa wazi kwenye tovuti ya kuingizwa (mara 40). (B) Inaweza kuonekana kuwa chondrocytes na seli za NP-kama huongezeka kwa kiasi kikubwa, na sura na ukubwa wa chondrocytes hazifanani (mara 40).
Usemi wa interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, na interferon γ (IFN-γ) mRNA zilizingatiwa katika vikundi vyote vya NPE na ME. Viwango vya kujieleza vya jeni lengwa vilipolinganishwa, misemo ya jeni ya IL-4, IL-17, na IFN-γ iliongezeka kwa kiasi kikubwa katika kundi la NPE ikilinganishwa na kundi la ME na kikundi cha uendeshaji cha sham (Mchoro 4) (P <0.05). Ikilinganishwa na kikundi cha operesheni ya uwongo, viwango vya kujieleza vya IL-4, IL-17, na IFN-γ katika kundi la ME viliongezeka kidogo tu na havikufikia mabadiliko ya takwimu (P > 0.05).
Usemi wa mRNA wa IL-4, IL-17 na IFN-γ katika kundi la NPE ulionyesha mwelekeo wa juu zaidi kuliko wale walio katika kikundi cha operesheni ya udanganyifu na kikundi cha ME (P <0.05).
Kinyume chake, viwango vya kujieleza katika kundi la ME havikuonyesha tofauti kubwa (P>0.05).
Uchambuzi wa doa wa Magharibi ulifanywa kwa kutumia kingamwili zinazopatikana kibiashara dhidi ya IL-4 na IL-17 ili kuthibitisha muundo wa usemi wa mRNA uliobadilishwa. Kama inavyoonyeshwa katika Mchoro 5A,B, ikilinganishwa na kikundi cha ME na kikundi cha operesheni ya udanganyifu, viwango vya protini vya IL-4 na IL-17 katika kundi la NPE viliongezeka kwa kiasi kikubwa (P <0.05). Ikilinganishwa na kikundi cha operesheni ya uwongo, viwango vya protini vya IL-4 na IL-17 katika kundi la ME pia vilishindwa kufikia mabadiliko muhimu kitakwimu (P> 0.05).
(A) Viwango vya protini vya IL-4 na IL-17 katika kundi la NPE vilikuwa vya juu zaidi kuliko vile vya kikundi cha ME na kikundi cha placebo (P <0.05). (B) historia ya doa ya Magharibi.
Kutokana na idadi ndogo ya sampuli za binadamu zilizopatikana wakati wa upasuaji, tafiti wazi na za kina juu ya pathogenesis ya MC ni vigumu kiasi fulani. Tulijaribu kuanzisha mfano wa wanyama wa MC ili kujifunza mbinu zake za patholojia zinazowezekana. Wakati huo huo, tathmini ya radiolojia, tathmini ya histolojia na tathmini ya kibiolojia ya molekuli zilitumiwa kufuata mwendo wa MC uliochochewa na NP autograft. Kama matokeo, modeli ya upandaji wa NP ilisababisha mabadiliko ya polepole katika kiwango cha ishara kutoka kwa muda wa wiki 12 hadi 20 (mchanganyiko wa ishara ya chini katika mlolongo wa T1W na ishara ya chini katika mlolongo wa T2W), ikionyesha mabadiliko ya tishu, na histological na molekuli. tathmini za kibiolojia zilithibitisha matokeo ya utafiti wa radiolojia.
Matokeo ya jaribio hili yanaonyesha kuwa mabadiliko ya kuona na ya kihistoria yalitokea kwenye tovuti ya ukiukwaji wa mwili wa vertebral katika kundi la NPE. Wakati huo huo, usemi wa jeni za IL-4, IL-17 na IFN-γ, pamoja na IL-4, IL-17 na IFN-γ zilizingatiwa, ikionyesha kuwa ukiukwaji wa tishu za autologous pulposus kwenye uti wa mgongo. mwili unaweza kusababisha mfululizo wa ishara na mabadiliko ya kimofolojia. Ni rahisi kupata kwamba sifa za ishara za miili ya uti wa mgongo wa mfano wa wanyama (ishara ya chini katika mlolongo wa T1W, ishara iliyochanganywa na ishara ya chini katika mlolongo wa T2W) ni sawa na ile ya seli za uti wa mgongo wa binadamu, na sifa za MRI pia. kuthibitisha uchunguzi wa histolojia na anatomy ya jumla, yaani, mabadiliko katika seli za mwili wa vertebral yanaendelea. Ingawa mwitikio wa uchochezi unaosababishwa na kiwewe cha papo hapo unaweza kutokea mara tu baada ya kuchomwa, matokeo ya MRI yalionyesha kuwa mabadiliko ya ishara yanayoongezeka yalionekana wiki 12 baada ya kuchomwa na kuendelea hadi wiki 20 bila dalili zozote za kupona au kubadilika kwa mabadiliko ya MRI. Matokeo haya yanaonyesha kuwa NP ya uti wa mgongo autologous ni njia ya kuaminika ya kuanzisha MV inayoendelea katika sungura.
Mtindo huu wa kuchomwa unahitaji ujuzi wa kutosha, wakati, na juhudi za upasuaji. Katika majaribio ya awali, kugawanyika au kusisimua kwa kiasi kikubwa kwa miundo ya ligamentous ya paravertebral inaweza kusababisha kuundwa kwa osteophytes ya vertebral. Uangalifu unapaswa kuchukuliwa ili usiharibu au kuwasha diski zilizo karibu. Kwa kuwa kina cha kupenya lazima kidhibitiwe ili kupata matokeo thabiti na ya kuzaliana, tulitengeneza kuziba kwa mikono kwa kukata ala ya sindano ya urefu wa 3 mm. Kutumia kuziba hii huhakikisha kina cha kuchimba visima katika mwili wa vertebral. Katika majaribio ya awali, madaktari watatu wa upasuaji wa mifupa waliohusika katika operesheni walipata sindano za kupima 16 rahisi kufanya kazi na sindano za kupima 18 au njia nyingine. Ili kuepuka kutokwa na damu nyingi wakati wa kuchimba visima, kushikilia sindano bado kwa muda itatoa shimo la kuingizwa linalofaa zaidi, na kupendekeza kuwa kiwango fulani cha MC kinaweza kudhibitiwa kwa njia hii.
Ingawa tafiti nyingi zimelenga MC, ni kidogo kinachojulikana kuhusu etiolojia na pathogenesis ya MC25,26,27. Kulingana na tafiti zetu za awali, tuligundua kuwa kingamwili ina jukumu muhimu katika kutokea na ukuzaji wa MC12. Utafiti huu ulichunguza usemi wa kiasi wa IL-4, IL-17, na IFN-γ, ambazo ni njia kuu za upambanuzi wa seli za CD4+ baada ya kusisimua antijeni. Katika utafiti wetu, ikilinganishwa na kundi hasi, kundi la NPE lilikuwa na usemi wa juu wa IL-4, IL-17, na IFN-γ, na viwango vya protini vya IL-4 na IL-17 pia vilikuwa vya juu.
Kliniki, usemi wa IL-17 mRNA huongezeka katika seli za NP kutoka kwa wagonjwa walio na disc herniation28. Viwango vya kujieleza vya IL-4 na IFN-γ vilivyoongezeka pia vilipatikana katika modeli ya papo hapo isiyo ya kukandamiza disc ikilinganishwa na udhibiti wa afya29. IL-17 ina jukumu muhimu katika kuvimba, kuumia kwa tishu katika magonjwa ya autoimmune30 na huongeza mwitikio wa kinga kwa IFN-γ31. Jeraha la tishu lililoimarishwa la IL-17 limeripotiwa katika MRL/lpr mice32 na panya zinazoweza kuathiriwa na kingamwili33. IL-4 inaweza kuzuia usemi wa saitokini za uchochezi (kama vile IL-1β na TNFα) na uanzishaji wa macrophage34. Iliripotiwa kuwa usemi wa mRNA wa IL-4 ulikuwa tofauti katika kundi la NPE ikilinganishwa na IL-17 na IFN-γ wakati huo huo; Usemi wa mRNA wa IFN-γ katika kundi la NPE ulikuwa wa juu zaidi kuliko ule wa vikundi vingine. Kwa hiyo, uzalishaji wa IFN-γ unaweza kuwa mpatanishi wa majibu ya uchochezi yanayotokana na kuingiliana kwa NP. Uchunguzi umeonyesha kuwa IFN-γ huzalishwa na aina nyingi za seli, ikiwa ni pamoja na seli za T za msaidizi wa aina ya 1, seli za muuaji wa asili, na macrophages35,36, na ni cytokine muhimu ya pro-inflammatory ambayo inakuza majibu ya kinga37.
Utafiti huu unapendekeza kwamba mwitikio wa kingamwili unaweza kuhusika katika kutokea na ukuzaji wa MC. Luoma et al. iligundua kuwa sifa za ishara za MC na NP maarufu zinafanana kwenye MRI, na zote zinaonyesha ishara ya juu katika mlolongo wa T2W38. Baadhi ya saitokini zimethibitishwa kuhusishwa kwa karibu na kutokea kwa MC, kama vile IL-139. Ma et al. ilipendekeza kuwa mwinuko wa juu au chini wa NP unaweza kuwa na ushawishi mkubwa juu ya kutokea na ukuzaji wa MC12. Bobechko40 na Herzbein et al.41 waliripoti kuwa NP ni tishu zisizo na kinga ambazo haziwezi kuingia kwenye mzunguko wa mishipa tangu kuzaliwa. Protrusions za NP huleta miili ya kigeni katika ugavi wa damu, na hivyo kupatanisha athari za ndani za autoimmune42. Athari za autoimmune zinaweza kushawishi idadi kubwa ya sababu za kinga, na wakati mambo haya yanapowekwa wazi kwa tishu kila wakati, yanaweza kusababisha mabadiliko katika kuashiria43. Katika utafiti huu, kujieleza kupita kiasi kwa IL-4, IL-17 na IFN-γ ni sababu za kawaida za kinga, na kuthibitisha zaidi uhusiano wa karibu kati ya NP na MCs44. Mtindo huu wa mnyama unaiga vizuri mafanikio ya NP na kuingia kwenye sahani ya mwisho. Mchakato huu ulifunua zaidi athari za kinga mwilini kwa MC.
Kama inavyotarajiwa, mtindo huu wa wanyama hutupatia jukwaa linalowezekana la kusoma MC. Hata hivyo, mtindo huu bado una vikwazo fulani: kwanza, wakati wa awamu ya uchunguzi wa wanyama, sungura wengine wa hatua ya kati wanahitaji kuunganishwa kwa ajili ya uchunguzi wa biolojia ya kihistoria na molekuli, hivyo wanyama wengine "huacha kutumika" baada ya muda. Pili, ingawa alama tatu za wakati zimewekwa katika utafiti huu, kwa bahati mbaya, tuliiga aina moja tu ya MC (aina ya Modic I change), kwa hivyo haitoshi kuwakilisha mchakato wa ukuzaji wa ugonjwa wa binadamu, na vidokezo vya muda zaidi vinapaswa kuwekwa bora uangalie mabadiliko yote ya ishara. Tatu, mabadiliko katika muundo wa tishu yanaweza kuonyeshwa kwa uwazi na madoa ya kihistoria, lakini baadhi ya mbinu maalum zinaweza kufunua vyema mabadiliko ya muundo mdogo katika mtindo huu. Kwa mfano, microscopy ya mwanga wa polarized ilitumiwa kuchambua uundaji wa fibrocartilage katika diski za intervertebral za sungura45. Madhara ya muda mrefu ya NP kwenye MC na endplate yanahitaji utafiti zaidi.
Sungura wa kiume hamsini na wanne wa New Zealand (uzito wa kilo 2.5-3, umri wa miezi 3-3.5) waligawanywa kwa nasibu katika kikundi cha operesheni ya sham, kikundi cha upandikizaji wa misuli (kundi la ME) na kikundi cha upandikizaji wa mizizi ya neva (kundi la NPE). Taratibu zote za majaribio ziliidhinishwa na Kamati ya Maadili ya Hospitali ya Tianjin, na mbinu za majaribio zilifanywa kulingana na miongozo iliyoidhinishwa.
Baadhi ya maboresho yamefanywa kwa mbinu ya upasuaji ya S. Sobajima 46 . Kila sungura iliwekwa katika nafasi ya nyuma ya recumbency na uso wa mbele wa diski tano za mfululizo za lumbar intervertebral (IVDs) zilifunuliwa kwa kutumia njia ya posterolateral retroperitoneal. Kila sungura alipewa anesthesia ya jumla (20% ya urethane, 5 ml / kg kupitia mshipa wa sikio). Mkato wa ngozi wa longitudinal ulifanywa kutoka ukingo wa chini wa mbavu hadi ukingo wa pelvic, sentimita 2 kutoka kwa misuli ya paravertebral. Mgongo wa kulia wa anterolateral kutoka L1 hadi L6 ulifunuliwa na mgawanyiko mkali na butu wa tishu zilizowekwa chini ya ngozi, tishu za nyuma, na misuli (Mchoro 6A). Kiwango cha diski kiliamuliwa kwa kutumia ukingo wa pelvic kama alama ya anatomia kwa kiwango cha diski cha L5-L6. Tumia sindano ya kupima 16 ili kuchimba shimo karibu na sahani ya mwisho ya vertebra ya L5 hadi kina cha 3 mm (Mchoro 6B). Tumia sindano ya 5-ml ili kutamani kiini cha pulposus cha autologous katika diski ya intervertebral L1-L2 (Mchoro 6C). Ondoa nucleus pulposus au misuli kulingana na mahitaji ya kila kikundi. Baada ya shimo la kuchimba kirefu, sutures zinazoweza kufyonzwa huwekwa kwenye fascia ya kina, uso wa juu na ngozi, kwa uangalifu usiharibu tishu za periosteal za mwili wa vertebral wakati wa upasuaji.
(A) Diski ya L5–L6 inafichuliwa kupitia mkabala wa nyuma wa nyuma wa nyuma. (B) Tumia sindano ya kupima 16 kutoboa shimo karibu na bati la mwisho la L5. (C) Autologous MFs huvunwa.
Anesthesia ya jumla ilitolewa kwa 20% ya urethane (5 ml / kg) iliyosimamiwa kupitia mshipa wa sikio, na radiographs ya mgongo wa lumbar ilirudiwa katika wiki 12, 16, na 20 baada ya upasuaji.
Sungura walitolewa dhabihu kwa kudungwa ndani ya misuli ya ketamine (25.0 mg/kg) na sodiamu pentobarbital ya mishipa (1.2 g/kg) katika wiki 12, 16 na 20 baada ya upasuaji. Mgongo mzima uliondolewa kwa uchambuzi wa histological na uchambuzi halisi ulifanyika. Unukuzi wa kurudi nyuma kiasi (RT-qPCR) na ukaushaji wa Magharibi ulitumiwa kugundua mabadiliko katika vipengele vya kinga.
Uchunguzi wa MRI ulifanyika kwa sungura kwa kutumia sumaku ya kimatibabu ya 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) iliyo na kipokezi cha coil ya kiungo cha orthogonal. Sungura walipigwa ganzi kwa 20% ya urethane (5 mL/kg) kupitia mshipa wa sikio na kisha kuwekwa supine ndani ya sumaku na eneo la kiuno likizingatia koili ya uso ya duara ya kipenyo cha inchi 5 (GE Medical Systems). Picha za ujanibishaji zenye uzani wa T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) zilipatikana ili kufafanua eneo la diski ya lumbar kutoka L3-L4 hadi L5-L6. Vipande vilivyo na uzito wa T2 vya ndege ya Sagittal vilipatikana kwa mipangilio ifuatayo: mlolongo wa haraka wa spin-echo na muda wa kurudia (TR) wa 2200 ms na muda wa echo (TE) wa 70 ms, matrix; uwanja wa kuona wa 260 na uchochezi nane; Unene wa kukata ulikuwa 2 mm, pengo lilikuwa 0.2 mm.
Baada ya picha ya mwisho kuchukuliwa na sungura wa mwisho kuuawa, sham, iliyopachikwa misuli, na diski za NP ziliondolewa kwa uchunguzi wa kihistoria. Tishu ziliwekwa katika 10% ya formalin iliyofungwa kwa upande wowote kwa wiki 1, kupunguzwa kwa asidi ya ethylenediaminetetraacetic, na parafini kugawanywa. Vitalu vya tishu viliwekwa kwenye mafuta ya taa na kukatwa katika sehemu za sagittal (unene wa 5 μm) kwa kutumia microtome. Sehemu zilichafuliwa na hematoksilini na eosini (H&E).
Baada ya kukusanya diski za uti wa mgongo kutoka kwa sungura katika kila kundi, jumla ya RNA ilitolewa kwa kutumia safu ya UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) kulingana na maagizo ya mtengenezaji na mfumo wa unukuzi wa reverse ImProm II (Promega Inc. , Madison, WI, USA). Unukuzi wa kinyume ulifanyika.
RT-qPCR ilitekelezwa kwa kutumia Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) na SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) kulingana na maagizo ya mtengenezaji. Kiasi cha majibu ya PCR kilikuwa 20 μl na kilikuwa na 1.5 μl ya cDNA iliyochanganywa na 0.2 μM ya kila primer. Primers ziliundwa na OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) na kutengenezwa na Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Jedwali la 1). Masharti yafuatayo ya uendeshaji wa baiskeli ya joto yalitumika: hatua ya awali ya kuwezesha polimerasi ifikapo 94°C kwa dakika 2, kisha mizunguko 40 ya sekunde 15 kila moja ifikapo 94°C kwa urekebishaji wa violezo, uwekaji hewa kwa dakika 1 kwa 60°C, upanuzi, na fluorescence. vipimo vilifanywa kwa dakika 1 kwa 72°C. Sampuli zote zilikuzwa mara tatu na thamani ya wastani ilitumika kwa uchanganuzi wa RT-qPCR. Data ya ukuzaji ilichambuliwa kwa kutumia FlexStation 3 (Vifaa vya Masi, Sunnyvale, CA, USA). IL-4, IL-17, na usemi wa jeni wa IFN-γ ulirekebishwa kuwa udhibiti wa asili (ACTB). Viwango vya kujieleza vinavyohusiana vya mRNA lengwa vilikokotolewa kwa kutumia mbinu ya 2-ΔΔCT.
Jumla ya protini ilitolewa kutoka kwa tishu kwa kutumia homogenizer ya tishu katika RIPA lysis buffer (iliyo na cocktail ya protease na phosphatase inhibitor) na kisha kuwekwa katikati kwa kasi ya 13,000 rpm kwa dakika 20 kwa 4°C ili kuondoa uchafu wa tishu. Mikrogramu hamsini za protini zilipakiwa kwa kila njia, zikitenganishwa na 10% SDS-PAGE, na kisha kuhamishiwa kwenye utando wa PVDF. Uzuiaji ulifanywa katika maziwa makavu yasiyo ya mafuta yasiyo na mafuta ya 5% katika salini ya Tris-buffered (TBS) yenye 0.1% Kati ya 20 kwa saa 1 kwenye joto la kawaida. Utando huo uliwekwa kwa kingamwili ya msingi ya kuzuia mapambo ya sungura (iliyopunguzwa 1:200; Boster, Wuhan, Uchina) (iliyopunguzwa 1:200; Bioss, Beijing, Uchina) mara moja saa 4°C na ilijibu kwa siku ya pili; na kingamwili ya pili (immunoglobulin ya mbuzi ya 1:40,000 dilution) pamoja na peroxidase ya horseradish (Boster, Wuhan, China) kwa saa 1 kwenye joto la kawaida. Ishara za mwako wa Magharibi ziligunduliwa kwa kuongezeka kwa chemiluminescence kwenye utando wa chemiluminescent baada ya miale ya X-ray. Kwa uchanganuzi wa densitometriki, doa zilichanganuliwa na kukaguliwa kwa kutumia programu ya BandScan na matokeo yalionyeshwa kama uwiano wa kutofanya kazi tena kwa jeni lengwa na kutofanya kazi tena kwa kinga ya tubulini.
Mahesabu ya takwimu yalifanywa kwa kutumia kifurushi cha programu cha SPSS16.0 (SPSS, USA). Data iliyokusanywa wakati wa utafiti ilionyeshwa kama wastani wa ± mchepuko wa kawaida (wastani ± SD) na kuchanganuliwa kwa kutumia uchanganuzi wa hatua moja unaorudiwa wa tofauti (ANOVA) ili kubaini tofauti kati ya vikundi viwili. P <0.05 ilizingatiwa kuwa muhimu kitakwimu.
Kwa hivyo, uanzishwaji wa mfano wa wanyama wa MC kwa kuingiza NP za autologous kwenye mwili wa uti wa mgongo na kufanya uchunguzi wa macroanatomical, uchambuzi wa MRI, tathmini ya kihistoria na uchambuzi wa kibiolojia wa molekuli inaweza kuwa chombo muhimu cha kutathmini na kuelewa taratibu za MC ya binadamu na kuendeleza matibabu mapya. kuingilia kati.
Jinsi ya kutaja makala hii: Han, C. et al. Mfano wa wanyama wa mabadiliko ya Modic ulianzishwa kwa kupandikiza kiini cha autologous pulposus kwenye mfupa wa subchondral wa mgongo wa lumbar. Sayansi. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., na Boos, N. Taswira ya mwangwi wa sumaku ya uti wa mgongo wa lumbar: kuenea kwa upenyezaji wa diski na uhifadhi, mgandamizo wa mizizi ya neva, upungufu wa sahani za mwisho, na osteoarthritis ya sehemu ya pamoja katika kujitolea bila dalili. . kiwango. Radiolojia 209, 661-666, doi:10.1148/radiolojia.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, na Leboeuf-Eed, K. Mabadiliko ya Modic na uhusiano wao na matokeo ya kliniki. European Spine Journal: uchapishaji rasmi wa Jumuiya ya Ulaya ya Mgongo, Jumuiya ya Ulaya ya Ulemavu wa Mgongo, na Jumuiya ya Ulaya ya Utafiti wa Mgongo wa Kizazi 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., na wengineo. Mabadiliko ya modic katika mwisho wa vertebral lumbar: kuenea na kushirikiana na maumivu ya chini ya nyuma na sciatica katika wafanyakazi wa kiume wa umri wa kati. Mgongo 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., na Dalinka, M. MRI ya mabadiliko ya uboho karibu na sahani ya mwisho katika ugonjwa wa kupungua kwa mgongo wa lumbar. AJR. Jarida la Marekani la Radiolojia 149, 531-534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, na Carter, JR Ugonjwa wa uharibifu wa disc: tathmini ya mabadiliko ya vertebral marrow na MRI. Radiolojia 166, 193-199, doi:10.1148/radiolojia.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, na Carter, JR Imaging ya ugonjwa wa disc degenerative. Radiolojia 168, 177-186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, na wengine. Watabiri wa mabadiliko ya ishara ya neovertebral endplate (Modic) katika idadi ya watu kwa ujumla. Jarida la Mgongo wa Ulaya: Uchapishaji Rasmi wa Jumuiya ya Mgongo wa Ulaya, Jumuiya ya Ulaya ya Ulemavu wa Mgongo, na Jumuiya ya Ulaya ya Utafiti wa Mgongo wa Kizazi, Kitengo cha 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB na Mannisch, K. Modic mabadiliko baada ya lumbar disc herniation. Jarida la Mgongo wa Ulaya : Uchapishaji Rasmi wa Jumuiya ya Mgongo wa Ulaya, Jumuiya ya Ulaya ya Ulemavu wa Mgongo na Jumuiya ya Ulaya ya Utafiti wa Mgongo wa Kizazi 16, 977-982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., na Kaapa, E. Mabadiliko ya aina ya Modic I yanaweza kutabiri kuzorota kwa diski ya deformational inayoendelea kwa kasi: utafiti unaotarajiwa wa mwaka 1. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ na Fan, mabadiliko ya SW Modic: sababu zinazowezekana na mchango wa kuzorota kwa diski ya lumbar. Dhana za Matibabu 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Kupasuka kwa diski ya ndani. Shida za diski za prolapse zaidi ya miaka 50. Mgongo (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Muda wa kutuma: Dec-13-2024