Asante kwa kutembelea Nature.com. Toleo la kivinjari unachotumia lina msaada mdogo wa CSS. Kwa matokeo bora, tunapendekeza kutumia kivinjari kipya (au njia ya utangamano katika Internet Explorer). Kwa sasa, ili kuhakikisha msaada unaoendelea, tutaonyesha tovuti bila mitindo na JavaScript.
Uanzishwaji wa mifano ya wanyama wa mabadiliko ya modic (MC) ni msingi muhimu wa kusoma MC. Sungura nyeupe za New Zealand za New Zealand ziligawanywa katika kikundi cha ushirika wa sham, kikundi cha kuingiza misuli (Kikundi cha ME) na Kikundi cha Uingizaji wa Pulposus (kikundi cha NPE). Katika kundi la NPE, diski ya intervertebral ilifunuliwa na njia ya upasuaji ya anterolateral lumbar na sindano ilitumiwa kuchoma mwili wa vertebral wa L5 karibu na sahani ya mwisho. NP ilitolewa kutoka kwa diski ya L1/2 intervertebral na sindano na kuingizwa ndani yake. Kuchimba shimo kwenye mfupa wa subchondral. Taratibu za upasuaji na njia za kuchimba visima katika kikundi cha kuingiza misuli na kikundi cha kazi cha sham zilikuwa sawa na zile zilizo kwenye kikundi cha kuingiza NP. Katika kundi la ME, kipande cha misuli kiliwekwa ndani ya shimo, wakati katika kikundi cha kazi cha sham, hakuna kitu kilichowekwa ndani ya shimo. Baada ya operesheni, skanning ya MRI na upimaji wa kibaolojia wa Masi ulifanywa. Ishara katika kikundi cha NPE ilibadilika, lakini hakukuwa na mabadiliko ya ishara dhahiri katika kikundi cha kazi cha sham na kikundi cha ME. Uchunguzi wa kihistoria ulionyesha kuwa kuongezeka kwa tishu zisizo za kawaida kulizingatiwa katika tovuti ya kuingiza, na usemi wa IL-4, IL-17 na IFN-γ uliongezeka katika kundi la NPE. Uingizaji wa NP ndani ya mfupa wa subchondral unaweza kuunda mfano wa wanyama wa MC.
Mabadiliko ya Modic (MC) ni vidonda vya endplates ya vertebral na karibu na uboho unaoonekana kwenye mawazo ya resonance ya sumaku (MRI). Ni kawaida kabisa kwa watu walio na dalili zinazohusiana1. Tafiti nyingi zimesisitiza umuhimu wa MC kwa sababu ya ushirika wake na maumivu ya chini ya mgongo (LBP) 2,3. De Roos et al.4 na Modic et al.5 kwa kujitegemea walielezea kwanza aina tatu tofauti za ukiukwaji wa ishara za subchondral katika mafuta ya mfupa wa vertebral. Mabadiliko ya aina ya Modic ni hypointense kwenye mlolongo wa T1-uzani (T1W) na hyperintense kwenye mlolongo wa T2-uzani (T2W). Lesion hii inaonyesha nyuzi za fissure na tishu za granulation za mishipa kwenye uboho. Mabadiliko ya aina ya II yanaonyesha ishara ya juu kwenye mlolongo wote wa T1W na T2W. Katika aina hii ya vidonda, uharibifu wa endplate unaweza kupatikana, pamoja na uingizwaji wa kihistoria wa mafuta ya karibu. Mabadiliko ya aina ya III yanaonyesha ishara ya chini katika mlolongo wa T1W na T2W. Vidonda vya sclerotic vinavyolingana na endplates vimezingatiwa6. MC inachukuliwa kuwa ugonjwa wa ugonjwa wa mgongo na inahusishwa sana na magonjwa mengi ya ugonjwa wa mgongo7,8,9.
Kuzingatia data inayopatikana, tafiti kadhaa zimetoa ufahamu wa kina juu ya etiolojia na mifumo ya ugonjwa wa MC. Albert et al. alipendekeza kwamba MC inaweza kusababishwa na disc herniation8. Hu et al. Iliyotajwa MC kwa kuzorota kwa disc10. KROC ilipendekeza wazo la "kupasuka kwa diski ya ndani," ambayo inasema kwamba kiwewe cha kurudia cha diski kinaweza kusababisha microtears kwenye endplate. Baada ya malezi ya CLEFT, uharibifu wa kumaliza na pulposus ya kiini (NP) inaweza kusababisha majibu ya autoimmune, ambayo husababisha maendeleo ya MC11. Ma et al. ilishiriki maoni kama hayo na kuripoti kwamba autoimmunity iliyosababishwa na NP inachukua jukumu muhimu katika pathogenesis ya MC12.
Seli za mfumo wa kinga, haswa CD4+ T msaidizi wa lymphocyte, zina jukumu muhimu katika pathogenesis ya autoimmunity13. Sehemu ndogo ya hivi karibuni ya Th17 inazalisha proinflammatory cytokine IL-17, inakuza usemi wa chemokine, na huchochea seli za T katika viungo vilivyoharibiwa kutoa IFN-γ14. Seli za Th2 pia zina jukumu la kipekee katika pathogenesis ya majibu ya kinga. Uonyeshaji wa IL-4 kama mwakilishi wa seli ya Th2 inaweza kusababisha athari kali za kinga15.
Ingawa tafiti nyingi za kliniki zimefanywa mnamo MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, bado kuna ukosefu wa mifano inayofaa ya majaribio ya wanyama ambayo inaweza kuiga mchakato wa MC ambao hufanyika mara kwa mara kwa wanadamu na unaweza kuwa Inatumika kuchunguza etiolojia au matibabu mapya kama vile tiba inayolenga. Hadi leo, ni aina chache tu za wanyama wa MC ambazo zimeripotiwa kusoma mifumo ya msingi ya ugonjwa.
Kulingana na nadharia ya autoimmune iliyopendekezwa na Albert na MA, utafiti huu ulianzisha mfano rahisi na wa kuzaa wa sungura wa MC na Autotransplanting NP karibu na sahani ya mwisho ya vertebral. Malengo mengine ni kuangalia sifa za kihistoria za mifano ya wanyama na kutathmini mifumo maalum ya NP katika maendeleo ya MC. Kwa maana hii, tunatumia mbinu kama vile biolojia ya Masi, MRI, na masomo ya kihistoria kusoma maendeleo ya MC.
Sungura wawili walikufa kwa kutokwa na damu wakati wa upasuaji, na sungura wanne walikufa wakati wa anesthesia wakati wa MRI. Sungura 48 zilizobaki zilinusurika na hazikuonyesha ishara za tabia au neva baada ya upasuaji.
MRI inaonyesha kuwa nguvu ya ishara ya tishu zilizoingia kwenye shimo tofauti ni tofauti. Nguvu ya ishara ya mwili wa vertebral ya L5 katika kundi la NPE ilibadilika polepole saa 12, 16 na 20 baada ya kuingizwa (mlolongo wa T1W ulionyesha ishara ya chini, na mlolongo wa T2W ulionyesha ishara iliyochanganywa pamoja na ishara ya chini) (Mtini. 1C), wakati kuonekana kwa MRI Kati ya vikundi vingine viwili vya sehemu zilizoingia zilibaki thabiti wakati huo huo (Mtini. 1A, B).
(A) Mwakilishi wa mwakilishi wa MRIs ya mgongo wa sungura kwa wakati 3. Hakuna ukiukwaji wa ishara zilizopatikana katika picha za kikundi cha ushirika wa sham. . (C) Katika kikundi cha NPE, ishara ya chini inaonekana wazi katika mlolongo wa T1W, na ishara iliyochanganywa na ishara ya chini zinaonekana wazi katika mlolongo wa T2W. Kutoka kwa kipindi cha wiki 12 hadi kipindi cha wiki 20, ishara za juu za sporadic zinazozunguka ishara za chini katika kupungua kwa mlolongo wa T2W.
Hyperplasia ya mfupa dhahiri inaweza kuonekana katika tovuti ya kuingiza ya mwili wa vertebral katika kundi la NPE, na hyperplasia ya mfupa hufanyika haraka kutoka wiki 12 hadi 20 (Mtini. 2C) ikilinganishwa na kikundi cha NPE, hakuna mabadiliko makubwa yanayozingatiwa katika vertebral ya mfano miili; Sham Group na Me Group (Mtini. 2C) 2a, b).
. (B) Sura ya tovuti iliyoingizwa katika kikundi cha ME ni sawa na ile katika kikundi cha operesheni ya sham, na hakuna mabadiliko dhahiri katika kuonekana kwa tovuti iliyoingizwa kwa wakati. (C) Hyperplasia ya mfupa ilitokea katika tovuti iliyoingizwa katika kundi la NPE. Hyperplasia ya mfupa iliongezeka haraka na hata kupanuliwa kupitia disc ya intervertebral kwa mwili wa contralateral vertebral.
Uchambuzi wa kihistoria hutoa habari zaidi juu ya malezi ya mfupa. Kielelezo 3 kinaonyesha picha za sehemu za kazi zilizowekwa na H&E. Katika kikundi cha ushirika wa sham, chondrocyte zilipangwa vizuri na hakuna kuongezeka kwa seli kugunduliwa (Mtini. 3A). Hali katika kundi la ME ilikuwa sawa na ile katika kikundi cha kazi cha sham (Mtini. 3B). Walakini, katika kundi la NPE, idadi kubwa ya chondrocyte na kuenea kwa seli kama za NP zilizingatiwa kwenye tovuti ya kuingiza (Mtini. 3C);
(A) Trabeculae inaweza kuonekana karibu na sahani ya mwisho, chondrocyte zimepangwa vizuri na saizi ya seli na sura na hakuna kuongezeka (mara 40). (B) Hali ya tovuti ya kuingiza katika kundi la ME ni sawa na ile ya kikundi cha sham. Trabeculae na chondrocyte zinaweza kuonekana, lakini hakuna kuongezeka dhahiri katika tovuti ya kuingiza (mara 40). .
Ishara ya interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, na interferon γ (IFN-γ) mRNA zilizingatiwa katika vikundi vya NPE na ME. Wakati viwango vya kujieleza vya jeni lengo vililinganishwa, maneno ya jeni ya IL-4, IL-17, na IFN-γ yaliongezeka sana katika kikundi cha NPE ikilinganishwa na ile ya kikundi cha ME na kikundi cha operesheni ya sham (Mtini. 4) (P <0.05). Ikilinganishwa na kikundi cha operesheni ya sham, viwango vya kujieleza vya IL-4, IL-17, na IFN-γ katika kikundi cha ME viliongezeka kidogo tu na hakufikia mabadiliko ya takwimu (p> 0.05).
Maoni ya mRNA ya IL-4, IL-17 na IFN-γ katika kikundi cha NPE ilionyesha hali ya juu zaidi kuliko ile iliyo kwenye kikundi cha operesheni ya sham na kikundi cha ME (p <0.05).
Kwa kulinganisha, viwango vya kujieleza katika kikundi cha ME havionyeshi tofauti kubwa (p> 0.05).
Uchambuzi wa blot Magharibi ulifanywa kwa kutumia antibodies zinazopatikana kibiashara dhidi ya IL-4 na IL-17 ili kudhibitisha muundo wa mRNA uliobadilishwa. Kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro 5A, B, ikilinganishwa na kikundi cha ME na kikundi cha operesheni ya sham, viwango vya protini vya IL-4 na IL-17 katika kundi la NPE viliongezeka sana (p <0.05). Ikilinganishwa na kikundi cha operesheni ya sham, viwango vya protini vya IL-4 na IL-17 katika kundi la ME pia vilishindwa kufikia mabadiliko makubwa ya takwimu (p> 0.05).
. (B) Historia ya blot ya Magharibi.
Kwa sababu ya idadi ndogo ya sampuli za wanadamu zilizopatikana wakati wa upasuaji, masomo wazi na ya kina juu ya pathogenesis ya MC ni ngumu sana. Tulijaribu kuanzisha mfano wa wanyama wa MC kusoma mifumo yake ya ugonjwa. Wakati huo huo, tathmini ya radiolojia, tathmini ya kihistoria na tathmini ya kibaolojia ya Masi ilitumika kufuata mwendo wa MC uliosababishwa na NP autograft. Kama matokeo, mfano wa uingizaji wa NP ulisababisha mabadiliko ya taratibu katika kiwango cha ishara kutoka kwa wiki 12 hadi wakati wa wiki 20 (ishara ya chini iliyochanganywa katika mlolongo wa T1W na ishara ya chini katika mlolongo wa T2W), ikionyesha mabadiliko ya tishu, na kihistoria na Masi Tathmini ya kibaolojia ilithibitisha matokeo ya utafiti wa radiolojia.
Matokeo ya jaribio hili yanaonyesha kuwa mabadiliko ya kuona na ya kihistoria yalitokea kwenye tovuti ya ukiukwaji wa mwili wa mwili katika kundi la NPE. Wakati huo huo, usemi wa aina ya IL-4, IL-17 na IFN-γ, na vile vile IL-4, IL-17 na IFN-γ zilizingatiwa, ikionyesha kuwa ukiukwaji wa tishu za pulposus za kiini kwenye uti wa mgongo katika vertebral Mwili unaweza kusababisha safu ya ishara na mabadiliko ya morphological. Ni rahisi kupata kuwa sifa za ishara za miili ya vertebral ya mfano wa wanyama (ishara ya chini katika mlolongo wa T1W, ishara iliyochanganywa na ishara ya chini katika mlolongo wa T2W) ni sawa na ile ya seli za vertebral za binadamu, na sifa za MRI pia Thibitisha uchunguzi wa historia na anatomy ya jumla, ambayo ni, mabadiliko katika seli za mwili wa vertebral yanaendelea. Ingawa majibu ya uchochezi yanayosababishwa na kiwewe vya papo hapo yanaweza kuonekana mara baada ya kuchomwa, matokeo ya MRI yalionyesha kuwa mabadiliko ya ishara ya kuongezeka kwa hatua yalionekana wiki 12 baada ya kuchomwa na kuendelea hadi wiki 20 bila dalili zozote za kupona au mabadiliko ya mabadiliko ya MRI. Matokeo haya yanaonyesha kuwa vertebral NP ni njia ya kuaminika ya kuanzisha MV inayoendelea katika sungura.
Mfano huu wa kuchomwa unahitaji ustadi wa kutosha, wakati, na juhudi za upasuaji. Katika majaribio ya awali, kutengana au kuchochea kupita kiasi kwa miundo ya ligamentous ya paravertebral inaweza kusababisha malezi ya osteophytes ya vertebral. Utunzaji unapaswa kuchukuliwa sio kuharibu au kukasirisha rekodi za karibu. Kwa kuwa kina cha kupenya lazima kudhibitiwa ili kupata matokeo thabiti na ya kuzaliana, tulitengeneza kwa mikono kwa kukata sheath ya sindano ya urefu wa 3 mm. Kutumia kuziba hii inahakikisha kina cha kuchimba visima kwenye mwili wa vertebral. Katika majaribio ya awali, waganga watatu wa upasuaji waliohusika katika operesheni hiyo walipata sindano 16 za kupima rahisi kufanya kazi na sindano za chachi 18 au njia zingine. Ili kuzuia kutokwa na damu nyingi wakati wa kuchimba visima, kushikilia sindano bado kwa muda itatoa shimo linalofaa zaidi, na kupendekeza kwamba kiwango fulani cha MC kinaweza kudhibitiwa kwa njia hii.
Ingawa tafiti nyingi zimelenga MC, kidogo inajulikana juu ya etiolojia na pathogenesis ya MC25,26,27. Kulingana na masomo yetu ya zamani, tuligundua kuwa autoimmunity ina jukumu muhimu katika tukio na maendeleo ya MC12. Utafiti huu ulichunguza usemi wa idadi ya IL-4, IL-17, na IFN-γ, ambayo ni njia kuu za kutofautisha za seli za CD4+ baada ya kuchochea antigen. Katika masomo yetu, ikilinganishwa na kikundi hasi, kikundi cha NPE kilikuwa na usemi wa juu wa IL-4, IL-17, na IFN-γ, na viwango vya protini vya IL-4 na IL-17 pia vilikuwa vya juu.
Kliniki, usemi wa IL-17 mRNA huongezeka katika seli za NP kutoka kwa wagonjwa walio na herniation28. Viwango vya kujieleza vya IL-4 na IFN-γ pia vilipatikana katika mfano wa papo hapo usio na nguvu wa disc ikilinganishwa na udhibiti wa afya29. IL-17 inachukua jukumu muhimu katika uchochezi, kuumia kwa tishu katika magonjwa ya autoimmune30 na huongeza majibu ya kinga kwa IFN-γ31. Kuumia kwa tishu zilizoboreshwa za IL-17 kumeripotiwa katika panya za MRL/LPR32 na panya za autoimmunity-zinazohusika. IL-4 inaweza kuzuia usemi wa cytokines za proinflammatory (kama IL-1β na TNFα) na uanzishaji wa macrophage34. Iliripotiwa kuwa usemi wa mRNA wa IL-4 ulikuwa tofauti katika kundi la NPE ikilinganishwa na IL-17 na IFN-γ wakati huo huo; Maoni ya mRNA ya IFN-γ katika kundi la NPE yalikuwa juu sana kuliko ile katika vikundi vingine. Kwa hivyo, uzalishaji wa IFN-γ unaweza kuwa mpatanishi wa majibu ya uchochezi yanayosababishwa na uhusiano wa NP. Uchunguzi umeonyesha kuwa IFN-γ inazalishwa na aina nyingi za seli, pamoja na seli 1 za msaidizi wa T, seli za muuaji wa asili, na macrophages35,36, na ni cytokine muhimu ya uchochezi ambayo inakuza majibu ya kinga37.
Utafiti huu unaonyesha kuwa majibu ya autoimmune yanaweza kuhusika katika tukio na maendeleo ya MC. Luoma et al. iligundua kuwa sifa za ishara za MC na NP maarufu ni sawa kwenye MRI, na zote mbili zinaonyesha ishara ya juu katika mlolongo wa T2W38. Cytokines zingine zimethibitishwa kuhusishwa kwa karibu na tukio la MC, kama vile IL-139. Ma et al. Alipendekeza kwamba kuongezeka kwa juu au kushuka kwa NP kunaweza kuwa na ushawishi mkubwa juu ya tukio na maendeleo ya MC12. Bobechko40 na Herzbein et al.41 waliripoti kuwa NP ni tishu isiyo na kipimo ambayo haiwezi kuingia kwenye mzunguko wa mishipa tangu kuzaliwa. Protrusions za NP huanzisha miili ya kigeni katika usambazaji wa damu, na hivyo kupatanisha athari za ndani za autoimmune42. Athari za autoimmune zinaweza kusababisha idadi kubwa ya sababu za kinga, na wakati mambo haya yanapofunuliwa kwa tishu, zinaweza kusababisha mabadiliko katika ishara43. Katika utafiti huu, overexpression ya IL-4, IL-17 na IFN-γ ni sababu za kawaida za kinga, ikithibitisha uhusiano wa karibu kati ya NP na MCS44. Mfano huu wa wanyama unaiga vizuri kufanikiwa kwa NP na kuingia kwenye sahani ya mwisho. Utaratibu huu ulifunua zaidi athari za autoimmunity kwenye MC.
Kama inavyotarajiwa, mfano huu wa wanyama hutupatia jukwaa linalowezekana la kusoma MC. Walakini, mtindo huu bado una mapungufu kadhaa: kwanza, wakati wa uchunguzi wa wanyama, sungura zingine za hatua za kati zinahitaji kusambazwa kwa upimaji wa baiolojia ya kihistoria na ya Masi, kwa hivyo wanyama wengine "hupotea" kwa wakati. Pili, ingawa vidokezo vitatu vimewekwa katika utafiti huu, kwa bahati mbaya, tulibadilisha aina moja tu ya MC (aina ya modic mimi hubadilika), kwa hivyo haitoshi kuwakilisha mchakato wa maendeleo ya ugonjwa wa binadamu, na vidokezo zaidi vya wakati vinahitaji kuwekwa Angalia bora mabadiliko yote ya ishara. Tatu, mabadiliko katika muundo wa tishu yanaweza kuonyeshwa wazi na madoa ya kihistoria, lakini mbinu fulani maalum zinaweza kufunua mabadiliko ya kipaza sauti katika mfano huu. Kwa mfano, microscopy nyepesi ya polarized ilitumiwa kuchambua malezi ya fibrocartilage katika discs ya sungura ya sungura45. Athari za muda mrefu za NP kwenye MC na Endplate zinahitaji masomo zaidi.
Sungura wa kiume wa hamsini na nne wa New Zealand (uzani wa kilo 2.5-3, umri wa miezi 3-3.5) waligawanywa kwa nasibu katika kikundi cha operesheni ya sham, kikundi cha kuingiza misuli (kikundi cha ME) na kikundi cha kuingiza mizizi (kikundi cha NPE). Taratibu zote za majaribio ziliidhinishwa na Kamati ya Maadili ya Hospitali ya Tianjin, na njia za majaribio zilifanywa kwa mujibu wa miongozo iliyoidhinishwa.
Maboresho kadhaa yamefanywa kwa mbinu ya upasuaji ya S. sobajima 46. Kila sungura iliwekwa katika nafasi ya kurudia ya nyuma na uso wa nje wa diski tano mfululizo za lumbar (IVDs) zilifunuliwa kwa kutumia njia ya nyuma ya nyuma. Kila sungura alipewa anesthesia ya jumla (20% urethane, 5 ml/kg kupitia mshipa wa sikio). Mchanganyiko wa ngozi ya longitudinal ulitengenezwa kutoka makali ya chini ya mbavu hadi ukingo wa pelvic, 2 cm ventral hadi misuli ya paravertebral. Mgongo wa anterolateral wa kulia kutoka L1 hadi L6 ulifunuliwa na mgawanyiko mkali na wazi wa tishu za subcutaneous, tishu za nyuma, na misuli (Mtini. 6A). Kiwango cha disc kiliamuliwa kwa kutumia kingo ya pelvic kama alama ya anatomiki kwa kiwango cha diski ya L5-L6. Tumia sindano ya kuchomwa ya glasi 16 kuchimba shimo karibu na sahani ya mwisho ya vertebra ya L5 kwa kina cha 3 mm (Mtini. 6B). Tumia sindano ya 5-ml kutamani pulposus ya kiini cha autologous kwenye disc ya L1-L2 (Mtini. 6C). Ondoa pulposus ya kiini au misuli kulingana na mahitaji ya kila kikundi. Baada ya shimo la kuchimba visima, suture zinazoweza kuwekwa huwekwa kwenye fascia ya kina, fascia ya juu na ngozi, ikichukua uangalifu usiharibu tishu za mwili wa mwili wakati wa upasuaji.
(A) Disc ya L5 -L6 imefunuliwa kupitia njia ya nyuma ya nyuma. (B) Tumia sindano ya kupima 16 kuchimba shimo karibu na Endplate ya L5. (C) MFs za Autologous zinavunwa.
Anesthesia ya jumla ilisimamiwa na 20% urethane (5 ml/kg) iliyosimamiwa kupitia mshipa wa sikio, na radiografia ya mgongo ilirudiwa saa 12, 16, na wiki 20 baada ya ushirika.
Sungura zilitolewa na sindano ya ndani ya ketamine (25.0 mg/kg) na intravenous sodiamu pentobarbital (1.2 g/kg) saa 12, 16 na wiki 20 baada ya upasuaji. Mgongo wote uliondolewa kwa uchambuzi wa kihistoria na uchambuzi wa kweli ulifanywa. Uandishi wa kurudi nyuma (RT-qPCR) na blotting ya Magharibi ilitumiwa kugundua mabadiliko katika sababu za kinga.
Mitihani ya MRI ilifanywa kwa sungura kwa kutumia sumaku ya kliniki ya 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) iliyo na mpokeaji wa viungo vya viungo vya orthogonal. Sungura zilibadilishwa na 20% urethane (5 ml/kg) kupitia mshipa wa sikio na kisha kuwekwa supine ndani ya sumaku na mkoa wa lumbar uliowekwa kwenye coil ya mviringo wa inchi 5 (GE Medical Systems). Picha za coronal T2 zenye uzito wa ndani (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) zilipatikana kufafanua eneo la diski ya lumbar kutoka L3-L4 hadi L5-L6. Ndege za Sagittal T2 zenye uzito zilipatikana na mipangilio ifuatayo: Mlolongo wa haraka wa spin-echo na wakati wa kurudia (TR) ya 2200 ms na wakati wa echo (TE) wa 70 ms, matrix; uwanja wa kuona wa 260 na nane kuchochea; Unene wa kukata ulikuwa 2 mm, pengo lilikuwa 0.2 mm.
Baada ya picha ya mwisho kuchukuliwa na sungura wa mwisho kuuawa, sham, misuli iliyoingia, na rekodi za NP ziliondolewa kwa uchunguzi wa kihistoria. Vipande viliwekwa katika 10% ya buffered ya buffered kwa wiki 1, iliyoamuliwa na asidi ya ethylenediaminetetraacetic, na mafuta ya taa. Vitalu vya tishu viliingizwa kwenye mafuta ya taa na kukatwa katika sehemu za sagittal (5 μm) kwa kutumia microtome. Sehemu zilibadilishwa na hematoxylin na eosin (H&E).
Baada ya kukusanya rekodi za intervertebral kutoka kwa sungura katika kila kikundi, jumla ya RNA ilitolewa kwa kutumia safu ya UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co, Ltd, Uchina) kulingana na maagizo ya mtengenezaji na mfumo wa maandishi wa INCOM II (Promega Inc. , Madison, WI, USA). Uandishi wa nyuma ulifanywa.
RT-qPCR ilifanywa kwa kutumia PRISM 7300 (Kutumika Biosystems Inc., USA) na SYBR Green Rukia Start Taq Readymix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) kulingana na maagizo ya mtengenezaji. Kiasi cha athari ya PCR kilikuwa 20 μL na kilikuwa na 1.5 μL ya cDNA iliyoongezwa na 0.2 μM ya kila primer. Primers zilibuniwa na mbuni wa oligoperfect (Attitrogen, Valencia, CA) na kutengenezwa na Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co, Ltd (China) (Jedwali 1). Hali zifuatazo za baiskeli za mafuta zilitumika: Hatua ya uanzishaji wa polymerase ya kwanza kwa 94 ° C kwa dakika 2, kisha mizunguko 40 ya 15 s kila moja kwa 94 ° C kwa kuharibika kwa template, kushikamana kwa dakika 1 kwa 60 ° C, ugani, na fluorescence. Vipimo vilifanywa kwa dakika 1 kwa 72 ° C. Sampuli zote ziliboreshwa mara tatu na thamani ya wastani ilitumika kwa uchambuzi wa RT-qPCR. Takwimu za ukuzaji zilichambuliwa kwa kutumia FlexStation 3 (vifaa vya Masi, Sunnyvale, CA, USA). IL-4, IL-17, na usemi wa jeni wa IFN-γ ulirekebishwa kwa udhibiti wa asili (ACTB). Viwango vya kujieleza vya jamaa ya mRNA ya lengo vilihesabiwa kwa kutumia njia ya 2-ΔΔCT.
Jumla ya protini ilitolewa kutoka kwa tishu kwa kutumia homogenizer ya tishu katika buffer ya RIPA (iliyo na proteni na phosphatase inhibitor cocktail) na kisha ikawekwa kwa kiwango cha 13,000 rpm kwa dakika 20 kwa 4 ° C ili kuondoa uchafu wa tishu. Vipeperushi hamsini vya protini vilipakiwa kwa njia, kutengwa na 10% SDS-PAGE, na kisha kuhamishiwa kwenye membrane ya PVDF. Kuzuia kulifanywa katika maziwa kavu ya 5% nonfat katika saline ya Tris-buffered (TBS) iliyo na 0.1% kati ya 20 kwa 1 h kwa joto la kawaida. Membrane ilifanywa na antibody ya msingi ya anti-decorin (iliyoongezwa 1: 200; Boster, Wuhan, Uchina) (Dilated 1: 200; Bioss, Beijing, Uchina) mara moja saa 4 ° C na ilijibu siku za pili; Na antibody ya sekondari (mbuzi anti-sungura immunoglobulin G saa 1: 40,000 dilution) pamoja na peroxidase ya farasi (Boster, Wuhan, Uchina) kwa saa 1 kwa joto la kawaida. Ishara za blot za Magharibi ziligunduliwa na kuongezeka kwa chemiluminescence kwenye membrane ya chemiluminescent baada ya umeme wa X-ray. Kwa uchambuzi wa densitometric, blots zilitatuliwa na kukaguliwa kwa kutumia programu ya BandScan na matokeo yalionyeshwa kama uwiano wa kinga ya jeni inayolenga kwa kinga ya tubulin.
Mahesabu ya takwimu yalifanywa kwa kutumia kifurushi cha programu cha SPSS16.0 (SPSS, USA). Takwimu zilizokusanywa wakati wa utafiti zilionyeshwa kama maana ± kupotoka kawaida (inamaanisha ± SD) na kuchambuliwa kwa kutumia njia za kurudia za hatua moja za uchambuzi wa tofauti (ANOVA) kuamua tofauti kati ya vikundi viwili. P <0.05 ilizingatiwa kuwa muhimu kwa takwimu.
Kwa hivyo, uanzishwaji wa mfano wa wanyama wa MC kwa kuingiza NPs za mwili ndani ya mwili wa uti wa mgongo na kufanya uchunguzi wa macroanatomical, uchambuzi wa MRI, tathmini ya kihistoria na uchambuzi wa kibaolojia inaweza kuwa zana muhimu ya kutathmini na kuelewa mifumo ya MC ya binadamu na kukuza matibabu mpya ya matibabu uingiliaji.
Jinsi ya kutaja nakala hii: Han, C. et al. Mfano wa wanyama wa mabadiliko ya modic ulianzishwa kwa kuingiza pulposus ya kiini cha autologous ndani ya mfupa wa subchondral wa mgongo wa lumbar. SCI. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., na Boos, N. Magnetic resonance imaging ya mgongo lumbar: kuongezeka kwa herniation ya disc na kutunza, compression ya mizizi ya mizizi, ukiukwaji wa sahani za mwisho, na ugonjwa wa mifupa ya pamoja ya wafanyakazi wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wa kujitolea wafanyakazi . kiwango. Radiology 209, 661-666, doi: 10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, na Leboeuf-Eed, K. Modic mabadiliko na uhusiano wao na matokeo ya kliniki. Jarida la Spine la Ulaya: Uchapishaji rasmi wa Jumuiya ya Spine ya Ulaya, Jumuiya ya Ulaya ya upungufu wa mgongo, na Jumuiya ya Ulaya ya Utafiti wa Spine ya kizazi 15, 1312-1319, Doi: 10.1007/S00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Mabadiliko ya Modic katika safu ya nguvu ya vertebral ya lumbar: maambukizi na ushirika na maumivu ya chini ya mgongo na sciatica katika wafanyikazi wa kiume wenye umri wa kati. Mgongo 32, 1116-1122, doi: 10.1097/01.Brs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., na Dalinka, M. MRI ya mabadiliko ya mfupa karibu na sahani ya mwisho katika ugonjwa wa mgongo wa mgongo. Ajr. Jarida la Amerika la Radiology 149, 531-55, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, na Carter, JR Degenerative Disc Ugonjwa: Tathmini ya mabadiliko ya mafuta ya vertebral na MRI. Radiology 166, 193–199, doi: 10.1148/radiolojia.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, na Carter, jr mawazo ya ugonjwa wa disc. Radiology 168, 177-186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Watabiri wa mabadiliko ya ishara ya neovertebral (MODIC) kwa idadi ya watu. Jarida la Spine la Ulaya: Uchapishaji rasmi wa Jumuiya ya Spine ya Ulaya, Jumuiya ya Ulaya ya Upungufu wa mgongo, na Jumuiya ya Ulaya ya Utafiti wa Mgongo wa Cervical, Idara ya 19, 129–135, DOI: 10.1007/S00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB na Mannisch, K. Modic mabadiliko baada ya lumbar disc herniation. Jarida la Spine la Ulaya: Uchapishaji rasmi wa Jumuiya ya Spine ya Ulaya, Jumuiya ya Ulaya ya upungufu wa mgongo na Jumuiya ya Ulaya ya Utafiti wa Spine ya Cervical 16, 977-982, DOI: 10.1007/S00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., na Kaapa, E. Modic Aina ya mabadiliko inaweza kutabiri kuzorota kwa kasi kwa disc: Utafiti wa mwaka 1. Jarida la Spine la Ulaya 21, 1135-1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ na Shabiki, mabadiliko ya modic: sababu zinazowezekana na mchango wa kuzorota kwa disc. Hypotheses ya matibabu 73, 930-932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV ya ndani ya disc. Disc inaongeza shida zaidi ya miaka 50. Mgongo (Phila PA 1976) 11, 650-653 (1986).
Wakati wa chapisho: DEC-13-2024